|
|
|
Лабораторная диагностика сифилиса. Прямые тесты
Енцов Д.В.
Материалом для исследования от больных сифилисом служит кровь, отделяемое твердого шанкра, пунктат регионарных лимфатических узлов, ликвор. Выбор материала для исследования и метода микробиологической диагностики определяется стадией патогенеза болезни. Лабораторная диагностика включает бактериоскопический (в начальной стадии) и серологический методы. Бактериологическое исследование обычно не проводят, так как доступные методы выделения чистой культуры возбудителя не разработаны. В связи с тем, что возбудитель сифилиса (Treponema pallidum) в отличие от других микроорганизмов плохо культивируется на питательных средах in vitro, а также слабо воспринимает анилиновые красители, все существующие методы ее детекции можно подразделить на прямые и непрямые: •прямые тесты основаны на непосредственном выявлении возбудителей в очагах поражения; ним относятся: (1) темнопольная микроскопия (в том числе прямой тест на Т. pallidum с флюоресцентными антителами - DFA-TP), (2) RIT (rabbit infektivity test) - заражение материалом от больных кроликов, и (3) ПЦР (полимеразная цепная реакция - метод, базирующиеся на амплификации нуклеиновых кислот). •непрямые тесты основаны на выявлении АТ к возбудителю сифилиса в сыворотке крови - серологическая диагностика (лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основанный на иммунологической реакции антиген-антитело (АГ-АТ)), а также редко используемые гистологические исследования. В свою очередь, все существующие в настоящее время серологические тесты на сифилис подразделяются на две основные группы: •нетрепонемные: реакция связывания комплемента с кардиолипиновым АГ (РСКк), реакция микропреципитации (РМП), тест быстрых плазменных реагинов - Rapid Plasma Reagins (RPR), Veneral Disease Research Laboratory (VDRL), тест с толуидиновым красным - Toluidin Red Unheated Serum Test (TRUST); •трепонемные - ракция связывания комплемента с трепонемным АГ (РСКт), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ или РИТ), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) (за рубежом - FTA - Fluorescent Treponemal anibody) с вариантами: РИФ-200 (FTA-200), РИФ-абс (FTA-abs), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) - за рубежом - Treponema pafluidum haemagglutination assay (TPHA), иммуноферментный анализ (ИФА) - за рубежом - Enzymelynked immunosorbent asay (ELISA), иммуноблоттинг (Western Blot). Прямые тесты Темнопольная микроскопия. Прямая визуализация трепонем методом темнопольной микроскопии является убедительным доказательством трепонемной природы заболевания. Наиболее эффективен этот метод при первичном и вторичном сифилисе, наличии поражения кожи и слизистых оболочек. При микроскопии следует дифференцировать Т. pallidum, подвид pallidum, с нитями фибрина, а также с трепонемами нормальной микрофлоры организма человека - Т. refringens и Т. denticola. Т. refringens колонизирует слизистые оболочки наружных половых органов и отличается выраженной подвижностью и отсутствием сгибательных движений. Т. denticola колонизирует слизистую оболочку ротовой полости, ее завитки короче и направлены под более острым углом. Темнопольная микроскопия обладает чувствительностью 74-86% и специфичностью до 97% в зависимости от квалификации исследователя. Чувствительность может снижаться, если повреждение было протерто антисептиком. Вместе с тем отрицательный результат, обусловленный различными факторами, не является основанием для исключения диагноза сифилиса и требует дальнейшего подтверждения методами серологической диагностики. Кроме того, с помощью этого метода невозможно наблюдать за динамикой инфекционного процесса и оценивать эффективность терапии. Прямой тест на Т. pallidum с флюоресцентными антителами (DFA-TP) использует флюоресцеинконъюгированные АТ для окраски организма в мазках и срезах тканей. DFA-TP не требует подвижных организмов, является более чувствительным и специфичным, но более дорогим и технически сложным, чем темнопольная микроскопия. На чувствительность обоих микроскопических методов может отрицательно повлиять давность возникновения или состояние повреждения, а также то, получал ли пациент лечение. Биологический метод диагностики (RIT - заражение материалом от больных кроликов), несмотря на его высокую чувствительность, применяется весьма ограничено из-за таких факторов, как длительность получения результатов и высокая стоимость. Он практически не используется в настоящее время. К прямым методам определения Т. pallidum по данным ряда зарубежных авторов относятся методы, базирующиеся на амплификации нуклеиновых кислот, такие как ПЦР, которые могут определять наличие всего 10 трепонем в повреждениях, тканях плаценты и других тканях организма. Они существенно улучшили чувствительность и специфичность прямых методов детекции. Множественный ПЦР с одновременным определением Т. pallidum, вируса герпеса типа 2 и Haemophilis ducreyi используется для постановки этиологического диагноза у пациентов с GUD (genital ulcer disease), а также для обоснования алгоритмов синдромного лечения. Поскольку ПЦР-методики для сифилиса коммерчески недоступны, они остаются инструментом исследователей. Ведущая роль в лабораторной диагностике сифилиса принадлежит серологическим методам исследования, так как Т. pallidum порождает иммунные ответы различного характера.
Доступ к документам и консультации
от ведущих специалистов |