Набор реагентов для выявления РНК вируса иммунодефицита человека методом ОТ-ПЦР. Инструкция по медицинскому применению медицинского изделия (утверждена приказом Председателя Комитета контроля качества и безопасности товаров и услуг МЗ РК от 17 мая 2020 года № 028962)

Утверждена

приказом Председателя

Комитета контроля качества

и безопасности товаров и услуг МЗ РК

от 17 мая 2020 года № 028962

Инструкция

по медицинскому применению медицинского изделия

1. Наименование медицинского изделия для диагностики in vitro:

Набор реагентов для выявления РНК вируса иммунодефицита человека методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени(РеалБест РНК ВИЧ) (форма 2)

2. Состав и описание медицинского изделия:

2.1. Состав:

Ÿ  положительный контрольный образец (ПКО) - 1 фл.

Ÿ  раствор для восстановления контрольных образцов (РВК) - 1 фл., 4 мл;

Ÿ  готовая реакционная смесь для ОТ-ПЦР (ГРС) - 48 пробирок;

Набор дополнительно комплектуется:

Ÿ   завинчивающейся крышкой для флакона с ПКО - 1 шт.

2.2. Принцип метода:

Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного специфического фрагмента кДНК (полученной методом обратной транскрипции из РНК ВИЧ), заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров на комплементарные последовательности, достройка полинуклеотидных последовательностей с этих праймеров Taq-полимеразой.

В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специфичного для данной кДНК гибридизационного ДНК-зонда, который в ходе реакции связывается с одной из цепей кДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5′-конце флуоресцентный краситель, а на 3′-конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи зонд расщепляется с 5′-конца, благодаря 5-3′-нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию уровня флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания уровня флуоресценции определяется исходным количеством кДНК в образце.

Учёт эффективности выделения РНК из образцов обеспечивается выделением РНК ВИЧ из образцов сыворотки (плазмы) крови совместно с внутренним контрольным образцом (ВКО).

2.3. Аналитические и диагностические характеристики:

2.3.1.Специфичность выявления РНК вируса иммунодефицита человека определяется по стандартной панели отрицательных сывороток предприятия, СПП ОКС (рег. № 05-2-214), как процентное содержание образцов, определённых набором как отрицательные, и составляет 100%.

2.3.2. Чувствительность определяется по пяти образцам с концентрацией РНК ВИЧ 20 МЕ/мл, приготовленным из СОП РНК ВИЧ (рег. № 05-2-213), как процентное содержание образцов, определённых набором как положительные, и составляет 100%.

2.4. Оборудование и материалы: