Набор реагентов «CAMOMILE- РНК ВИЧ количественный». Инструкция по медицинскому применению изделия медицинского назначения (утверждена приказом председателя Комитета фармации МЗ РК от 14 июня 2019 года № 021985)

Утверждена

приказом председателя

Комитета фармации МЗ РК

от 14 июня 2019 года № 021985

Инструкция

по медицинскому применению изделия медицинского назначения

Название изделия медицинского назначения

Набор реагентов «CAMOMILE- РНК ВИЧ количественный» для выявления и количественного определения РНК вируса иммунодефицита человека методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени

Состав и описание изделия

1. Характеристика набора

Принцип метода

Набор укомплектован всеми необходимыми компонентами для проведения всего комплекса процедур по концентрированию и выделению РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) из сыворотки (плазмы) крови, проведению ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени и вычислению количества РНК ВИЧ с учетом калибровочных и контрольных образцов.

Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного специфического фрагмента кДНК (полученной методом обратной транскрипции из РНК ВИЧ), заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных последовательностей с этих праймеров Taq-полимеразой.

В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специфичного для данной кДНК гибридизационного ДНК-зонда, который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце флуоресцентный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5’-3’ нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется исходным количеством кДНК в образце.

Количественный учет эффективности выделения РНК из образцов обеспечивается выделением РНК вируса иммунодефицита человека из образцов сыворотки (плазмы) крови совместно с предварительно внесенным внутренним контрольным образцом (ВКО), что позволяет контролировать эффективность выделения РНК из анализируемых образцов и учитывать при вычислении концентрации РНК ВИЧ.

1.1. Состав набора

Объемы реагентов, указанных в перечне, могут иметь допустимую погрешность.

1) Концентрирующий раствор-готовый для применения; прозрачная бесцветная жидкость - 4 флакона по 14,0 ± 0,5 мл;

2) Лизирующий раствор №1 - готовый для применения; прозрачная бесцветная жидкость, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании - 4 флакона по 4,0 ± 0,5 мл;