| ||||||||||||||||||||
|
|
|
29.09.2014 Молекулярно-генетическая экспертиза
Жумалиева А.К. Главный эксперт ЦИСЭ (г.Астана)
В гражданском судопроизводстве при рассмотрении дел о расторжении брака, взыскании алиментов, оспаривании отцовства и др. довольно часто возникает необходимость установления истинного биологического отцовства и материнства граждан в отношении детей. Современные возможности молекулярно-генетической экспертизы позволяют устанавливать кровное родство между отдельными людьми, в том числе и отцовство с большой долей вероятности - до 99,9999%. Простейшим и наиболее частым случаем определения родства является установление отцовства. При исследовании этой степени родства проводится типирование (получение генотипов) ребенка, матери (желательно, но не необходимо) и предполагаемого отца по аутосомным STR-локусам. Затем проводится анализ полученных генотипов для каждого, взятого отдельно, локуса на предмет их соответствия заявленным родственным отношениям. Далее будет показано, как осуществляется этот анализ. Всё сказанное в данном разделе справедливо и для случаев установления материнства. Вариант 1. Случай, когда для анализа доступен материал всех троих лиц, то есть матери, ребенка и мужчины, для которого требуется установить отцовство в отношении ребенка. Мать считается априори родной. В данном случае при анализе генотипов, используется следующее правило, основанное на законах передачи генетического материала: в генотипе ребенка по любому локусу один из аллелей всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологического отца по данному локусу, а другой аллель всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологической матери по данному локусу. Генотип дочери по выбранному нами локусу - pq, а генотип матери - qy. Так как мать считается априори родной, и только аллель q присутствует как в генотипе матери, так и в генотипе ребенка, то именно аллель q был получен ребенком от матери (стрелка зеленого цвета на рисунке). Аллель p получен ребенком от истинного биологического отца и должен присутствовать в его генотипе. В данном примере в генотипе предполагаемого отца (xp) содержится аллель p, совпадающий с аллелем отцовского происхождения в генотипе ребенка, что свидетельствует в пользу истинности отцовства (стрелка красного цвета на рисунке). Вариант 2. Случай, когда материал матери недоступен, то есть исследуется материал ребенка и предполагаемого отца. При недоступности для анализа материала матери используется следующее правило: в генотипе ребенка по любому локусу один из аллелей всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологического отца по данному локусу. В соответствии с законами наследования один из аллелей получен от биологической матери, другой от биологического отца. В случае когда генотип матери по анализируемому локусу неизвестен и мы не можем установить, какой аллель получен от матери (стрелка со знаком вопроса на рисунке) и, соответственно, не можем определить аллель отцовского происхождения. Тем не менее наличие в генотипе предполагаемого отца аллеля p, совпадающего с одним из аллелей в генотипе дочери, свидетельствует в пользу истинного отцовства (стрелка красного цвета на рисунке 9). Следует отметить, что это свидетельство имеет меньший «вес», чем в случае, когда аллель предполагаемого отца совпадает с аллелем отцовского происхождения в генотипе ребенка, установленном с помощью анализа генотипа матери. Это, естественно, учитывается при дальнейших расчетах уровня достоверности. Уровень доказательности экспертного заключения определен следующим образом: При не исключении родства для одного из родителей и бесспорного родства другого родителя - не ниже 99,90%. При не исключении родства для одного из родителей и отсутствии другого родителя - не ниже 99,75%. Рассмотрим примеры, в которых генотипы анализируемых лиц свидетельствуют против предположения о родстве. Вариант 1. Случай, когда для анализа доступен материал всех троих лиц, то есть матери, ребенка и мужчины, для которого требуется установить отцовство в отношении ребенка. Мать считается априори родной. Повторимся, что в данном случае при анализе генотипов используется следующее правило, основанное на законах передачи генетического материала: в генотипе ребенка по любому локусу один из аллелей всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологического отца по данному локусу, а другой аллель всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологической матери по данному локусу. Когда генотипы ребенка, матери и предполагаемого отца по данному локусу свидетельствуют против истинности отцовства. Генотип дочери по выбранному нами локусу - pq, а генотип матери - qy. Так как мать считается априори родной, и только аллель q присутствует как в генотипе матери, так и в генотипе ребенка, то именно аллель q был получен ребенком от матери. Аллель p получен дочерью от истинного биологического отца и должен присутствовать в его генотипе. В генотипе предполагаемого отца (xz) не содержится аллеля отцовского происхождения из генотипа ребенка (p), что свидетельствует против предположения об истинном родстве. Важно рассмотреть еще один вариант, показывающий желательность участия матери в проведении анализа. Например, когда один из аллелей в генотипе предполагаемого отца совпадает с одним из аллелей в генотипе ребенка, однако в совокупности генотипы трех лиц свидетельствуют против истинности отцовства. Генотип сына по выбранному нами локусу - pq, а генотип матери - qy. Так как мать считается априори родной, и только аллель q присутствует как в генотипе матери, так и в генотипе ребенка, то именно аллель q был получен ребенком от матери (стрелка зеленого цвета на рисунке). Аллель p получен сыном от истинного биологического отца и должен присутствовать в его генотипе. В генотипе предполагаемого отца (xq) не содержится аллеля отцовского происхождения из генотипа ребенка (p), что свидетельствует против предположения об истинном родстве. Следует отметить, что если бы исследовалось родство данного ребенка и данного мужчины в отсутствии материала матери, то генотипы по данному локусу ребенка и предполагаемого отца свидетельствовали бы в пользу отцовства, так как в генотипе отца имеется аллель q. Таким образом, использование материала матери при установлении отцовства повышает достоверность исследования, а его отсутствие - приводит к необходимости анализа большего числа локусов при анализе биологического материала только предполагаемого отца и ребенка. Вариант 2. Случай, когда материал матери не доступен, то есть исследуется материал ребенка и предполагаемого отца. При недоступности для анализа генотипа матери используется следующее правило: в генотипе ребенка по любому локусу один из аллелей всегда совпадает с одним из аллелей в генотипе биологического отца по данному локусу. Например, когда генотипы ребенка и предполагаемого отца по данному локусу свидетельствуют против истинности отцовства. Генотип дочери - pq. В соответствии с законами наследования один из аллелей получен от биологической матери, другой от биологического отца. В данном случае генотип матери по анализируемому локусу неизвестен и мы не можем установить, какой аллель получен от матери и, соответственно, не можем определить аллель отцовского происхождения. Тем не менее, отсутствие в генотипе предполагаемого отца аллелей, совпадающих с одним из аллелей в генотипе дочери, свидетельствует против предположения об истинности отцовства. Какой вывод делается, если выявлено несоответствие предположения об истинном родстве законам передачи наследственной информации в генотипах по одному или нескольким локусам? Генотипы по определенному локусу могут свидетельствовать против истинного отцовства не только вследствие того, что предполагаемый отец не приходится биологическим отцом ребенку, но также по причине того, что у биологического отца или матери произошла мутация. Вероятность такого события крайне мала, однако пренебречь ею нельзя. Поэтому вывод об исключении родства делается только тогда, когда против истинности отцовства свидетельствуют генотипы по нескольким локусам.
Установление родства сибсов
На практике встречаются случаи, когда необходимо установить родство для сибсов (людей, имеющих общих родителей или одного общего родителя), но материал предполагаемых родителей недоступен. Далее рассмотрены способы установления родства для предполагаемых сибсов. Родство типа-брат-брат Например, два брата получают от общего отца идентичные копии Y-хромосомы, а от общей матери - митохондриальную ДНК. Следовательно, при установлении родства для сибсов мужского пола, имеющих предположительно общего отца и разных матерей, когда материал предполагаемого отца недоступен (например в случае его смерти), проводится анализ на родство по мужской линии, для сибсов мужского пола, имеющих предположительно общую мать, проводится анализ на родство по женской линии. При установлении родства для полных сибсов (предположительно имеющих обоих общих родителей) проводится анализ родства как по женской, так и по мужской линиям. Родство типа сестра-сестра Например, сестры получают от общего отца идентичные копии X-хромосомы. Из этого следует правило -X-хромосома, женщины: у женщин, имеющих общего биологического отца, в генотипах по любому локусу X-хромосомы всегда присутствует как минимум один общий аллель. Заметим, что данное правило справедливо и для случая, когда нужно определить родство для женщин имеющих предположительно общего отца, материал которого недоступен (например в случае смерти предполагаемого отца), но различных матерей. Исследование женщин на родство по отцу проводится по следующей схеме: · типирование образцов предполагаемых сестер по отцу по системе STR-локусов, лежащих на X-хромосоме; · анализ полученных генотипов на наличие совпадающих аллелей. При наличии совпадающих аллелей в генотипах женщин по всем исследуемым локусам проводится расчет достоверности положительного вывода о родстве по отцу. Следует отметить, что наличие совпадающих аллелей в генотипах по локусам X-хромосомы у двух женщин может являться не только следствием их родства по отцу или случайного совпадения генетических признаков, но и результатом их родства по матери. Данное обстоятельство должно приниматься во внимание при проведении вероятностных расчетов в каждом конкретном случае. Какой вывод делается, если выявлено отсутствие совпадающих аллелей в генотипах женщин по одному или нескольким локусам X-хромосомы? Генотипы по определенному локусу могут свидетельствовать против истинного родства не только вследствие того, что исследуемые женщины не являются сестрами по отцу, но также по причине того, что у биологического отца произошла мутация. Поэтому вывод об исключении родства делается только тогда, когда против истинности родства свидетельствуют генотипы по нескольким локусам. В Центре Молекулярной Генетики вывод об исключении родства делается только тогда, когда против истинности родства свидетельствуют генотипы по трем или более локусам. В случае выявления несовпадений по одному или двум локусам проводится типирование по дополнительной линейке локусов, и в случае, если генотипы по дополнительным локусам свидетельствуют в пользу родства, проводится вероятностный расчет с учетом возможных мутаций. Женщины, имеющие общую мать, получили от нее митохондриальную ДНК. Следовательно, для сибсов женского пола, имеющих предположительно общую мать, проводится анализ на родство по женской линии. При установлении родства для полных сибсов (предположительно имеющих обоих общих родителей) проводится анализ родства, как по женской линии, так и с использованием полиморфных локусов X-хромосомы. Родство типа брат-сестра Например, брат и сестра получают от общей матери митохондриальную ДНК. Следовательно, при установлении родства для разнополых сибсов, имеющих предположительно общую мать, проводится анализ на родство по женской линии. Для разнополых сибсов, имеющих предположительно общего отца, установление родства по мужской линии, а также с использованием типирования по локусам X-хромосомы невозможно. Сибсы являются примером такой степени родства, при котором в генотипах родственников по аутосомным локусам не обязательно должны содержаться совпадающие аллели, например, когда генотипы сибсов по определенному локусу либо полностью совпадают, либо вообще не имеют общих аллелей. Несмотря на это, наличие в генотипах по аутосомным локусам совпадающих аллелей у сибсов более вероятно, чем у неродственных лиц, что позволяет использовать подход, основанный на вычислении условных вероятностей. Исследование родства в данном случае проводится по следующей схеме: · типирование исследуемых лиц по аутосомным STR-локусам; · вычисление на основе популяционных данных о частоте аллелей исследуемых локусов отношения правдоподобий LR, то есть отношения вероятности наблюдать выявленные генотипы при условии, что исследуемые лица являются сибсами, к вероятности наблюдать выявленные генотипы при условии, что исследуемые лица не являются родственниками; · вычисление вероятности родства. Если вероятность родства достигает требуемого уровня достоверности, то делается заключение об истинности родства. Если вероятность родства не достигает требуемого уровня достоверности, то либо проводится анализ дополнительных локусов, либо делается вывод о невозможности дать обоснованное заключение.
Доступ к документам и консультации
от ведущих специалистов |